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研究背景
膿毒癥是一種由感染引發(fā)的致命性全身炎癥反應，每年導致超過1400萬人死亡。2025年，海軍軍醫(yī)大學研究團隊在《Cell Communication and Signaling》期刊發(fā)表的研究（DOI：10.1186/s12964-025-02278-w）發(fā)現(xiàn)，RNA聚合酶II亞單位5介導蛋白（RMP）是巨噬細胞先天免疫的關鍵調(diào)控因子。研究顯示，RMP通過結(jié)合IκB激酶β（IKKβ）并招募蛋白磷酸酶2A（PP2A），抑制Toll樣受體4（TLR4）誘導的NF-κB信號通路，從而控制膿毒癥期間的過度炎癥。這一機制為減輕膿毒癥相關損傷提供了潛在的治療靶點。
客戶需求
海軍軍醫(yī)大學研究小組需要高純度的RMP和IKKβ蛋白，用于體外研究，通過表面等離子共振（SPR）、GST下拉實驗和ADP-Glo激酶實驗，探索兩者的相互作用。普健生物（AtaGenix Laboratories Co., Ltd.）受托提供GST、GST-小鼠RMP-WT、GST-小鼠RMP-S439A和His-小鼠IKKβ的定制蛋白表達與純化服務，確保蛋白質(zhì)適用于Western blot（WB）驗證和功能實驗。
技術挑戰(zhàn)
1. 蛋白純度：確保蛋白高純度，以保證SPR和GST下拉實驗結(jié)果的準確性。
2. 功能完整性：保持RMP和IKKβ的結(jié)構(gòu)與功能特性，確保激酶和結(jié)合實驗的可靠性。
3. 突變蛋白表達：生產(chǎn)高質(zhì)量的RMP-S439A突變體，以研究其與IKKβ的增強結(jié)合能力。
定制蛋白解決方案
1. 蛋白表達與純化：
- 采用優(yōu)化的大腸桿菌表達系統(tǒng)，表達GST、GST-小鼠RMP-WT、GST-小鼠RMP-S439A和His-小鼠IKKβ。
- 純化蛋白至高純度，確保適用于SPR（OpenSPR系統(tǒng)）、GST下拉實驗和ADP-Glo激酶實驗。
2. 驗證與支持：
- 通過WB實驗驗證蛋白功能，確認蛋白完整性及特異性相互作用。
- 提供技術支持，優(yōu)化SPR和GST下拉實驗中蛋白的表現(xiàn)，確保RMP-IKKβ及RMP-PP2Ab相互作用的精確分析。
高純度蛋白幫助研究團隊確認了RMP通過招募PP2A抑制IKKβ的作用，RMP-S439A突變體顯示出與IKKβ的增強結(jié)合能力。通過WB驗證的蛋白支持了研究結(jié)果，進一步揭示了RMP作為膿毒癥治療靶點的潛力。
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