重組蛋白表達(dá)系列五

昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)

展示案例：Baculovirus / Insect Cells expression system

昆蟲細(xì)胞與哺乳動物細(xì)胞翻譯和翻譯后蛋白修飾的模式與能力相似，表達(dá)的重組蛋白與天然蛋白相似且具有完整的生物活性，細(xì)胞懸浮生長，容易實現(xiàn)大規(guī)模低成本生產(chǎn)；桿狀病毒能容納大分子的插入片段，易于表達(dá)異源多聚體蛋白。由于其不具有任何對哺乳動物有潛在致病性的動物病毒片段，昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)問世以來，獲得了人們的高度重視。

 

普健生物的桿狀病毒-昆蟲蛋白表達(dá)服務(wù)，采用經(jīng)典的Bac-to-Bac表達(dá)體系，并加以改進(jìn)。在表達(dá)方式（胞內(nèi)或分泌）、信號肽選擇、細(xì)胞培養(yǎng)方式及細(xì)胞選擇（Sf9、Sf21、Hi5）等方面有著豐富的案例經(jīng)驗，表達(dá)成功率高達(dá)99.9%，同時可提供高達(dá)200 L的蛋白表達(dá)純化服務(wù)。

 

案例展示

Project Information

Beta-glucosidase（后文簡寫為BetaGluc1）是纖維素分解酶系中的重要組成成分，能夠水解結(jié)合于末端非還原性的β-D-葡萄糖鍵，同時釋放出β-D-葡萄糖和相應(yīng)的配基，參與生物糖代謝，對維持生物正常生理功能其重要作用。

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BetaGluc1采用普健桿狀病毒-昆蟲表達(dá)系統(tǒng)成功可溶表達(dá)，產(chǎn)量高達(dá)234.2mg/L，純度>95%，經(jīng)檢驗活性較高。

 

以圖為鑒

Test Report

01

Western Blot with ECL. Detection with anti-His antibodies.

BetaGluc1 protein have expressed in sf9 cells, and they have expressed in culture medium. BetaGluc1 clone 4 was picked to generate P2 virus and do MOI test.

 

02

According to the MOI test results, the best expression condition is: BetaGlu1: 150ul, Hi5, in culture medium.

 

03

 

Purification Test

200ml scale-up and purification using High 5 cells. Purification tests results of culture medium are illustrated below.

MW. Molecular weight marker. IN.Input. FT. Flow through. W. Washes. E.Eluted fractions.

 

04

Purification QC

Reducing-PAGE analysis. 2µg of sample loaded. 1.2 are BetaGlu1

 

05

 

Fermentation and Purification

1L scale up purification test

MW. Molecular weight marker. IN. Input. FT. Flow through. W. Washes. E. Eluted fractions.

 

06

Final QC

Reducing-PAGE analysis. 2µg of sample loaded. 1. 2 are BetaGlu1

 

 

普健生物昆蟲桿狀病毒表達(dá)服務(wù)

表達(dá)體系選擇

多種表達(dá)載體：胞內(nèi)表達(dá)和分泌表達(dá)載體系列

多種表達(dá)細(xì)胞：Sf9，Sf21，Hi-5

 

表達(dá)及純化測試

高效率：優(yōu)化表達(dá)方案，實驗周期短；

P1代病毒生產(chǎn)及表達(dá)測試，P2代病毒生產(chǎn)及MOI測試。

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大規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)

可滿足高達(dá)200 L的生產(chǎn)規(guī)模。

 

一站式服務(wù)

基因設(shè)計及優(yōu)化、蛋白表達(dá)及純化、后續(xù)加工處理、數(shù)據(jù)報告等。

 

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